数字PCR即Digital PCR,它是是一种核酸分子绝对定量技术。数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。
在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?现在我们再也不需要去纠结这个问题了,因为数字PCR帮我们解决了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字 PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。
数字PCR技术的原理
数字PCR(也可称单分子PCR)一般包括两部分内容,即PCR扩增和荧光信号分析。在PCR扩增阶段,与传统技术不同,数字PCR一般需要将样品稀释到单分子水平,并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR对每个循环进行实时荧光测定的方法,数字PCR技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。
图1.数字PCR技术原理:A: 数字PCR过程,第一步稀释样本分配至每个反应单元进行PCR反应,第二步荧光检测;B:分子信标
基因突变分析原理;C:BEAMing检测原理。
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